Rekombinantā SUMO proteāze (Ulp1, His-tag)

 

Produkta nosaukums	kat. Nē.	Spec.
Rekombinantā SUMO proteāze (Ulp1, His-tag)	G3411-2000U	2000 U

 

 

Rekombinantā SUMO proteāze ir ļoti aktīva cisteinilproteāze, kas pazīstama arī kā Ulp1 (ubikvitīnam līdzīgā proteāze 1). aminoskābju secība. Optimālā temperatūra šķelšanai ir 30 grādi; tomēr ferments ir aktīvs plašos temperatūras (2-30 grādi) un pH (pH 6.{{10}}–10.0) diapazonos. Faktiskajā darbībā, lai saglabātu mērķa proteīna struktūru un bioloģisko aktivitāti, ieteicams lietot Rekombinanto SUMO proteāzi 4 grādu temperatūrā uz nakti. Tajā pašā laikā atbilstošas ​​DTT koncentrācijas (05-2 mM) pievienošana gremošanas sistēmā var arī ievērojami uzlabot gremošanas efektivitāti. SUMO proteāze, ļoti aktīva cisteinilproteāze, kas pazīstama arī kā Ulp, ir rekombinants Ulp1 (Ubl specifiskā proteāze 1) no Saccharomyces cerevisiae. SUMO proteāze sadalās ļoti specifiskā veidā, atpazīstot ubikvitīnam līdzīgā (UBL) proteīna terciāro struktūru, SUMO, nevis aminoskābju secību. Proteāzi var izmantot, lai atdalītu SUMO no rekombinantiem saplūšanas proteīniem. Optimālā temperatūra šķelšanai ir 30 grādi; tomēr ferments ir aktīvs plašos temperatūras (2-30 grādi) un pH (pH 6,0–10,0) diapazonos. Pēc sagremošanas SUMO proteāzi viegli atdala no šķelšanās reakcijas ar afinitātes hromatogrāfiju, izmantojot polihistidīna marķējumu proteāzes N-galā.

 

 

Proteāzi var izmantot, lai atdalītu SUMO no rekombinantiem saplūšanas proteīniem.

Avots: Saccharomyces cerevisiae cisteīna proteāze. To attīra no E. coli ar afinitātes hromatogrāfiju, izmantojot polihistidīna marķējumu.

Fermentu aktivitāte: Viena SUMO proteāzes vienība sašķeļ vairāk vai vienādi ar 85% no 2 µg kontroles substrāta 1 stundā pie 30 grādiem un pH 8,0.

Inaktivācija vai inhibīcija: imidazola koncentrācija, kas lielāka par 150 mM, var negatīvi ietekmēt proteāzes aktivitāti.

Tīrība un koncentrācija: tīrība ir lielāka vai vienāda ar 95% pēc SDS-PAGE, 10 U/μL.

Rekombinantās SUMO proteāzes uzglabāšanas šķīdums: 25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0,1% NP-40, 250 mM NaCl, 500 μM DTT, 50% (v/v ) glicerīns.

10×SUMO buferis+sāls: 500 mM Tris-HCl, pH 8,0,2% NP-40, 1,5 M NaCl, 10 mM DTT.

10×SUMO buferis — sāls: 500 mM Tris-HCl, pH 8,0,2% NP-40, 10 mM DTT.

 

 

Kuģis ar slapju ledu; Uzglabāt pie -20 grāda ; Derīgs 12 mēnešus.

 

 

Komponenta numurs	Komponents	G3411-2000U
G3411-1	Rekombinantā SUMO proteāze (His-tag) (10 U/μL)	200 μL
G3411-2	10 × SUMO buferšķīdums + sāls	1 ml
G3411-3	10×SUMO buferis – sāls	1 ml
G3411-4	Kontrolēt proteīnu	100 μL
Rokasgrāmata

 

 

1. Ieteicamā proteāzes gremošanas sistēma:

Komponents	Apjoms
10×SUMO buferis +/- sāls	5 μL
Mērķa olbaltumvielas	20 ug
Rekombinantā SUMO proteāze (His-tag) (10 U/μL)	1 μL
ddH2O	Līdz 50 μL

 

Piezīme. Lielākajai daļai saplūšanas proteīnu SUMO proteāze darbojas optimāli reakcijas maisījumā, kas satur 150 mM NaCl; tomēr apstākļus var optimizēt, mainot NaCl koncentrāciju no 0 mM līdz 300 mM.

2. Novietojiet 30 grādu temperatūrā uz 1, 2 vai 4 stundām. Tas var arī sagremot 4 grādu temperatūrā nakti (apmēram 16 stundas), ja mērķa proteīns nav stabils 30 grādos.

3. Izņemiet 10 μL fermentu sagremošanas produkta SDS-PAGE elektroforēzei, lai novērtētu fermentu sagremošanas daudzumu un reakcijas apstākļus.

 

 

1. Ievietojiet ledus kastē vai ledus vannā, kad lietojat, un atsevišķi uzglabājiet -20 grādu temperatūrā uzreiz pēc lietošanas.

2. Jūsu drošībai un veselībai, lūdzu, valkājiet aizsargbrilles, cimdus vai aizsargtērpu.

Fermentu gremošanas lietojumu piemēri

1. attēls. Kontroles substrāta proteīna (SUMO+B saplūsmes olbaltumvielas) rekombinantā SUMO proteāzes fermentācijas ietekme (enzīmu sagremošanas apstākļi ir attiecīgi 30 grādi un pH 8.0, attiecīgi 0 min, 10 min. , 20 min, 30 min, 1 h, 2 h un 4 h, kas savukārt atbilst joslai 1-7, un substrāta un fermenta masas attiecībai pievieno fermentu gremošanas sistēma ir 10:1)

 

Tikai pētniecībai!

 

 

Populāri tagi: rekombinantās sumo proteāzes (ulp1, his-tag), Ķīnas rekombinantās sumo proteāzes (ulp1, his-tag) ražotāji, piegādātāji, rūpnīca