Kumassie Brilliant Blue G250

Coomassie Brilliant Blue G250 var ātri saistīt olbaltumvielas. Coomassie Brilliant Blue G250 maksimālā absorbcija brīvā stāvoklī ir 488 nm. Pēc saistīšanās ar olbaltumvielām maksimālā absorbcija mainījās uz 595 nm. Optiskās absorbcijas vērtība ir proporcionāla proteīna saturam, tāpēc to var izmantot proteīna kvantitatīvai noteikšanai. Šo produktu var izmantot arī kā papildinājumu G2001 Bradford Assay proteīna kvantitatīvās noteikšanas komplektam.

Nosūtīt un uzglabāt istabas temperatūrā, derīga 12 mēnešus.

1. (Pēc izvēles) Standarta līknes zīmēšana (mikroplašu lasītāja metode): izšķīdiniet BSA ūdenī, lai sagatavotu 0,5 mg/mL proteīna standarta darba šķīdumu. Proteīna standarta darba šķīdumu pievieno 96-iedobes plāksnei 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 μL līmenī un pēc tam gradienta apstrādi. šķīdums tiek papildināts līdz 20 μL ar PBS vai fizioloģisko šķīdumu. Olbaltumvielu koncentrācijas gradienta līknes ir 0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 un 500 ug/ml. Ja tiek veikti tikai relatīvi kvantitatīvi salīdzinājumi, standarta līknes nav vajadzīgas.

2. Sagatavojiet pārbaudāmo paraugu: pārbaudāmo proteīna paraugu atbilstoši atšķaida (proteīna koncentrāciju paraugā var noteikt ar iepriekšēju eksperimentu, lai tā būtu standarta līknes diapazonā, lai nodrošinātu testa rezultāta ticamību ), un 20 μL katra parauga pievieno 96-iedobes plāksnei. Pārbaudāmais paraugs jāatšķaida tajā pašā šķīdumā, kurā ir proteīna standarts.

3. Noteikšana: katrā iedobē pievieno 200 μL Coomassie briljantzilā G250 šķīduma un rūpīgi samaisa (96-iedobes plāksni var novietot uz oscilatora uz 30 sekundēm). Pēc 3-5 min istabas temperatūrā standarta līkne Nr. 0 tiek izmantota kā atsauce, un kolorimetriskais mērījums tiek veikts pie viļņa garuma 595 nm, un tiek reģistrēta katras iedobes absorbcijas vērtība.

4. Aprēķins: gradienta proteīna saturu (ug/mL) standarta līknē ņem par abscisu līniju, un gaismas absorbcijas vērtību ņem par ordinātu standarta līknes zīmēšanai. Atbilstoši parauga absorbcijas vērtībai attiecīgajā iedobē izmērāmā parauga olbaltumvielu koncentrāciju var atrast uz standarta līknes (ug/mL), un pēc tam reizinot ar parauga atšķaidījumu, faktiskā proteīna koncentrācija izmērāmais paraugs.

5. Turklāt: ja noteikšanai izmanto spektrofotometru, stikla mēģeni vai stikla kolorimetrisko cauruli izmanto kā reakcijas trauku, lai izveidotu standarta līknes. Pēc testējamā proteīna parauga pareizas atšķaidīšanas pievienojiet to jaunai stikla mēģenei vai kolorimetriskajai mēģenei ar parauga lielumu 1 ml. Pievienojiet 3 ml Coomassie briljantzilā G250 šķīduma standarta līknes gradienta stobriņā un parauga stobriņā, rūpīgi samaisiet, nostādiniet istabas temperatūrā 3-5 min., pēc tam izmantojiet spektrofotometru kolorimetriskai noteikšanai.

6. Noteikšana: Spektrofotometra viļņa garums ir iestatīts uz 595 nm, un standarta līkne un pārbaudāmais paraugs tiek pielīdzināti nullei, izmantojot standarta līknes Nr. 0 mēģeni kā atsauci. Standarta līknes novelk, kā aprakstīts 4. solī, un aprēķina proteīnu koncentrācijas pārbaudāmajos paraugos.

1. Pirms lietošanas produkts jāatjauno līdz istabas temperatūrai un jāsamaisa otrādi, lai neietekmētu noteikšanas jutīgumu.

2. Jūsu drošībai un veselībai, lūdzu, valkājiet aizsargbrilles, cimdus vai aizsargtērpu.

Tikai pētniecībai!

Populāri tagi: coomassie brilliant blue g250, Ķīna coomassie brilliant blue g250 ražotāji, piegādātāji, rūpnīca