Fluo-4 AM Fluorescent Calcium Long noteikšanas komplekts

Fluo-4 ir uzlabota Fluo-3 versija, ko parasti izmanto bioloģiskajos kalcija jonu noteikšanas eksperimentos. Galvenā atšķirība ir tā, ka divi hlora atomi Fluo-3AM molekulā tiek aizstāti ar fluoru. Fluo-4AM, un nelielas izmaiņas struktūrā var paātrināt Fluo-4AM ielādi un noteikšanas signāls ir spēcīgāks pie tādas pašas koncentrācijas. Tā kā Fluo-4AM zondes AM grupa ne tikai aptver Fluo-4 helātu veidojošā kalcija molekulāro daļu, bet arī uzlabo tā hidrofobitāti, tā var viegli iekļūt dzīvās šūnas membrānā un iekļūt šūnā. Kad Fluo-4AM iekļūst šūnā, laktāze to sagriež Fluo-4, tādējādi paliekot šūnā. Fluo-4 pašam ir maz fluorescences, bet, ja to apvieno ar intracelulāriem kalcija joniem, tas var radīt spēcīgu fluorescenci. Fluorescences intensitāte ir proporcionāla intracelulārajam kalcija saturam.

Šis komplekts galvenokārt ir balstīts uz iepriekš minētajiem noteikšanas principiem, Fluo{0}}AM kā galveno daļu, un nodrošina īpašu atbilstības buferi, viegli lietojamu un jutīgāku noteikšanu. Kalcija jonu saturu dzīvās šūnās vai kalcija jonu dinamiskās izmaiņas šūnās var izmērīt ar fluorescences mikroskopu, plūsmas analizatoru, enzīmu marķētāju utt.

Kuģis ar sauso ledu; Uzglabāt -20 grādos prom no gaismas, derīgs 12 mēnešus.

Piezīme. Iepriekš minētie komplekta reakcijas laiki atbilst 96-iedobes plates testa sistēmai.

1. Sagatavošana pirms eksperimenta: šūnas tiek inokulētas 96-iedobju plāksnēs un iepriekš apstrādātas atbilstoši eksperimenta mērķim;

2. Fluo-4 AM darba risinājuma konfigurācija: sagatavojiet Fluo-4 AM darba risinājumu atbilstoši vajadzībām, konfigurācijas sistēmu var atsaukties uz šo tabulu, ņemiet vērā, ka dažādi šūnu raksturlielumi ir atšķirīgi atbilstoši eksperimenta faktisko situāciju var pievienot vai samazināt izmantotās zondes koncentrāciju, sākotnējais ieteicamais atšķaidīšanas koeficients 1:500;

3. Krāsošanas marķieri (piemērā ar pielipušām šūnām; suspensijas šūnām katru reizi ir jāmaina šķidrums, tāpēc, lūdzu, veiciet centrifugēšanu pats):

3.1. Izņemiet sākotnējo šūnu kultūras barotni un mazgājiet šūnas 2-3 reizes ar PBS vai citiem buferšķīdumiem;

3.2. Noņemiet mazgāšanas buferšķīdumu, pievienojiet 100 μL Fluo-4 AM darba šķīdumu katrai iedobei un inkubējiet šūnu inkubatorā 37 grādu temperatūrā 30 minūtes prom no gaismas;

3.3. Inkubācijas beigās izņemiet Fluo-4 AM darba šķīdumu un mazgājiet šūnas 2-3 reizes, izmantojot PBS vai citus buferšķīdumus;

3.4. Nomainiet ar kalcija jonu noteikšanas buferi un turpiniet inkubāciju 15-30min, lai nodrošinātu adekvātu Fluo-4AM hidrolīzi šūnās (pēc izvēles);

4. Fluorescences noteikšana: izmantojiet fluorescences mikroskopu, enzīmu marķieri un citus instrumentus, lai to noteiktu. Fluo-4 AM ir zaļa fluorescējoša ar EX/EM ≈ 494/528 nm.

1. Atšķirīgo starpšūnu īpašību un dažādu pirmapstrādes metožu dēļ soļos aprakstītā zondes izmantošanas un inkubācijas laika diapazona attiecība ir tikai atsaucei, un to var pielāgot atbilstoši konkrētiem apstākļiem.

2. Fluorescējošām krāsvielām ir dzēšanas problēmas, lūdzu, pievērsiet uzmanību, lai izvairītos no gaismas darbības, lai palēninātu fluorescences dzēšanu.

3. Fluo-4AM ir ļoti jutīgs pret mitrumu, tāpēc, izmantojot pirmo reizi, lūdzu, iesaiņojiet to pareizi saskaņā ar eksperimentālo kārtību. Fluo-4 AM Testa darba šķīdumam jābūt gatavam lietošanai.

4. Daži nokrišņi pēc atkausēšanas ir normāla parādība, un pirms lietošanas tie ir pilnībā sakrata, lai nodrošinātu, ka tie ir pilnībā izšķīduši.

5. Pamatojoties uz šīs zondes darbības principu, šūnas nav iespējams apstrādāt, piemēram, fiksāciju vai perforāciju.

6. Jūsu veselībai un drošībai darbības laikā, lūdzu, valkājiet laboratorijas mēteli un cimdus.

Tikai pētniecībai!

Populāri tagi: fluo-4 am fluorescējošā kalcija lon noteikšanas komplekts, Ķīna fluo-4 am fluorescējošā kalcija lon noteikšanas komplekta ražotāji, piegādātāji, rūpnīca